【北京总部】Bio-Rad 售后服务热线:4008-987080 MyCycler 是一款 96 孔高性价比 PCR 仪。它配备有12 厘米(4 .7") 高分辨率显示屏,用户可以*而快速的进行程序编写。人性化的菜单可以帮助用户以较快的速度完成反应的各项设置。其具体性能如下: ? ? 96 孔反应模块,专为0 .2ml 的 PCR 反应管或反应板而设计 ? ? 直观的程序编写设置,包括温度、时间和程序等 ? 用户可设置休眠模式使其更节电 ? 仪器每次运行情况会保存在运行报告和校正报告中 ? ? 自动调节式热盖适合于各种标准的 0 .2ml PCR 反应管,条管和反应板 ? 可选择进行梯度 PCR 功能升级,可以同时在8个不同温度条件下孵育,以便在一次实验中优化实验条件 基本的PCR须具备 1.要被复制的DNA模板 Template 2.界定复制范围两端的引物Primers. 3.DNA聚合酶Taq. Polymearse 4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。 工作原理 利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。 反应步骤 分别是1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 较后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。 PCR的较早设想核酸研究已有100多年的历史,二十世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年较早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制,只是改进与完善Mullis较初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段,其缺点是: ①Klenow酶不耐高温, 90℃会变性失活,每次循环都要重新加。 ②引物链延伸反应在37℃下进行,*发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增具备许多**的优点,但由于Klenow酶不耐热,在DNA模板进行热变性时,会导致此酶钝化,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。这使得PCR技术在一段时间内没能引起生物医学界的足够重视。 1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。 1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌thermus aquaticus 中提取到一种耐热DNA聚合酶。 此酶具有以下特点: ①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。 ②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。 ③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度2.0Kb。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶IKlenow片段区别,将此酶命名为TaqDNA多聚酶Taq DNAPolymerase。此酶的发现使PCR广泛的被应用。